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引用 | 我来说两句

PCR增强剂

PCR增强剂能够促进各种耐热DNA聚合酶对许多复杂结构的DNA模板(如高GC含量)的有效扩增,增加PCR反应的灵敏度和特异性。其原理是通过提高DNA聚合酶的热稳定性,降低模板DNA的二级结构等机制提高目的片段的产量。

常见的PCR增强剂有:二甲基亚砜(DMSO)、甘油、甲酰胺、硫酸铵,BSA等。

1. DMSO:改善GC含量高的DNA的变性情况,使聚合酶更容易在二级结构处延伸,但是当浓度高时(大于10%)时会降低保真性。

2. 甘油:提高产量,增加酶的稳定性,含量(5–20%)。

3. 甲酰胺:促进某些“引物-模板”退火,降低带有二级结构的DNA的变性温度,含量(1.25-10%)。

4. 硫酸铵:增加反应体系的离子强度,改变DNA的变性及退火温度,调节酶活。

建议先摸索出合适的PCR Enhancer及其添加浓度后再进行PCR扩增。

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